prokazyme dlig120说明书

海藻的Rma DNA连接酶

 € 220,00 – € 320,00

耐高温NAD +依赖的双链DNA连接酶，温度范围在5到65°C之间。 

prokazyme DNA连接酶说明书

SKU：dlig120。
类别：酶

描述

来自海生红球藻的 DNA连接酶是一种热稳定的NAD +依赖性双链DNA连接酶，温度范围介于5至65°C之间。所述enzym DNA的具有高保真Ë催化结扎并适合于各种应用，包括基因合成。

产品Dlig120 Rma DNA连接酶可提供500单位和2000单位，以及10x反应缓冲液。

商品名：Dlig120S | DNA连接酶500单位| 价格：220.00 EUR

商品名：Dlig120L | DNA Ligase 2000单位| 价格：320.00 EUR

产品描述

介绍：

Rma DNA连接酶催化双链DNA结构中相邻3′-羟基和5′-磷酸末端的NAD依赖性连接。与T4 DNA连接酶相反，Rma DNA连接酶对平末端DNA的片段没有可检测的活性。与T4 DNA连接酶不同，Rma DNA连接酶在宜温度条件下仅显示4 bp和2 bp的共粘性末端的小连接活性。Rma DNA连接酶对RNA靶没有活性。从带有质粒的大肠杆菌菌株中分离和纯化Rma DNA连接酶，该质粒带有克隆的DNA连接酶基因，该基因来自冰岛分离的嗜热细菌Rhodother-mus marinus（1、2）。Rma连接酶在91°C下的半衰期为7分钟（2）。该酶具有广泛的反应温度范围，宜活性约为55°C。

应用范围：

Tsc DNA连接酶是需要高温，高严格性的双链DNA连接的理想酶.Tsc DNA连接酶可用于：

• 来自重叠寡核苷酸的基因合成（12）。

储存：
储存和稀释缓冲液：20 mM Tris-HCl，50 mM KCl，0.1 mM EDTA，0.1％Triton X-100（v / v），1 mM二硫苏糖醇（DTT），50％甘油（v / v），pH 7.6（25℃）。当在–15°C至-25°C下储存时，Rma DNA连接酶是稳定的。

反应条件：
1 x反应缓冲液（已提供10 x）20 mM Tris-HCl，20 mM KCl，10 mM MgCl2、0.1％Nonidet P40（v / v），0.5 mM NAD，1 mM DTT，pH 7 ，5（25°C）。

浓度和单位定义
浓度10 U /μl。1个单位的Rma DNA连接酶在45°C下在1分钟内催化1μgBstEII消化的λDNA的cos位点的50％连接。

应用方案：活性测定： 用于单位定义的酶测定是连接用BstII消化的λDNA的cos位点。

 

在45°C孵育1-15分钟，在干冰/乙醇浴中停止反应。在琼脂糖凝胶上分析之前，在65°C下孵育10分钟（融解未连接的cos位点）

通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色测定结果。

质量控制：

质量控制：
如下所述测定每批Tsc DNA连接酶的活性和污染活性。

缺少DNA核酸内切酶：

• 将0.25μg超螺旋pBR322 DNA与递增量的Tsc DNA连接酶在25μl反应中于37°C孵育16小时。大于100 U的Tsc DNA连接酶显示pBR322 DNA的超螺旋结构没有松弛。

• 在37℃和64℃下，在25 µl反应中用Tsc DNA连接酶诱导加入0.25 µgλ-DNAEco RI / HindIII片段16 h。100 U的Tsc DNA连接酶显示未改变条带模式。

核酸外切酶的缺失：将
越来越多的Tsc DNA连接酶在50μl含有[3H]标记的DNA的测试缓冲液中于37°C和64°C孵育4小时。显示无核酸外切酶活性的酶量> 100U。

缺少Rnases：
根据制造商协议，使用Ambion的RNaseAlertTM Lab Test Kit（目录号1964）检测RNase活性。1小时后，在37°C下孵育XU Tsc DNA连接酶后，未检测到RNase活性。

参考文献：

• Alfredsson GA等。1988.微生物学杂志。134：299-306
• Torbjarnardottir SH等。1995.基因161：1-6
• Housby JN等。2000。核酸研究。28：e10。
• Housby JN等。2001。肛门。生化。302：88-94
• Sutton JR等。1992.转基因研究1：228